简石生物快速RNA小量提取试剂盒(TR154)

产品简介：

简石生物快速RNA小量提取试剂盒(TR154)适用于从细胞、组织、酵母菌、植物或者细菌中提取到总RNA(含microRNA)；提取到的RNA不含DNA, 并可应用于qPCR, 高通量测序等实验。

产品属性：

1、样品来源：细胞、组织、酵母、植物或者细菌，兼容各种保护剂；

2、样品范围：最多10⁷细胞或50mg的组织；

3、RNA纯度：高质量的RNA可应用于高通量测序等敏感的下游实验；

4、RNA回收率：可从30μL洗脱体积中回收到100μg的RNA。

产品操作步骤：

整个操作步骤是由3个步骤组成：I）样品裂解匀浆；II）样品处理；III）样品纯化。所有步骤均在室温下操作(20-30℃)。

I) 样品裂解匀浆

(1)贴壁细胞

去除液体培养基后，直接往培养板中加入RNA裂解液溶解细胞，并用移液枪轻轻吹打混匀。依据细胞的数量来决定所需的RNA裂解液量。

(2)悬浮细胞

离心沉淀细胞（≤500 xg），完全去除上清后用RNA裂解液重悬细胞沉淀，可短暂涡旋振荡。

(3)其他组织

其他难裂解的组织、酵母、植物匀浆需要配合蛋白酶K和裂解珠（选配）。

(4)DNA/RNA保护剂中的组织

将添加了DNA/RNA保护剂的匀浆样品放到室温下，添加1体积的RNA裂解、混匀、然后进行样品清理步骤。

II) 样品处理与基因组DNA去除

此步骤主要是针对动植物组织和细胞，对于样品量很低（细胞数≤10⁵）或无细胞的液体样本则无需此步。

1. 将上述匀浆裂解物在离心力≥10,000 xg下离心1分钟；

2. 将上清移至3号Y纯化柱，纯化柱套在一个收集管内，在离心力≥10,000 xg下离心1分钟去除DNA。保存滤出液用于RNA纯化。

III) 样品纯化

以下离心力均在10,000-16,000 xg范围内进行；

1. 加入等体积（95-100%）的无水乙醇到上一步含有RNA裂解液的上清中混匀；

2. 将上述混合物放入套在收集管上的3号G纯化柱里，离心1分钟。去除滤出液；

3. 柱上 DNase I 消化处理（可选）；

4. 此步骤主要是为了去除痕量的 DNA；

a) 添加400μL的RNA洗涤液到3号G纯化柱里离心1分钟，去除滤出液；

b) 对于每一次的样品处理需要制备80μL的DNase I反应液。配比为 DNase I 5μL、DNA消化液75μL；

c)直接添加80μL的DNase I反应液到3号G纯化柱上，在室温下（20-30℃）孵育15分钟；

4. 添加400μL的RNA预洗液到3号G纯化柱里，离心1分钟，去除滤出液；

5. 添加700μL的RNA洗涤液到3号G纯化柱里，离心1分钟，去除滤出液；

6. 添加400μL的RNA洗涤液到3号G 纯化柱里，离心2 分钟以去除残留的乙醇，以免抑制下游反应；

7. 取出3号G纯化柱，放入一个无RNA酶的离心管中，在吸附膜的中间部位加100μL RNase free water，室温放置2分钟，离心1分钟洗脱RNA。

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