简石生物总RNA提取试剂盒—TRIZOL磁珠法(TB210)

产品简介：

简石生物总RNA提取试剂盒—TRIZOL磁珠法(TB210)适用于从细胞，组织，酵母菌，植物，细菌或生物液体（任何 TRIZOL 或类似产品可以裂解的样品）及保存在样本保存液中的样品提取到总 RNA（含 microRNA）。无需进行相分离，无需使用氯仿，无需沉淀过程。提取到的 RNA 不含 DNA,并可应用于 Q-PCR，高通量测序等实验。

产品特点：

★    样品来源：TRIZOL 等类似试剂裂解的样品及保存在 DNA/RNA 保护剂中的样品。

★    提取到高质量 RNA 可应用于 NGS、RT/PCR 等实验。

产品操作步骤：

实验分样品裂解和RNA提取两个部分。

(I)样品裂解匀浆

此步骤主要参考TRIZOL等类似裂解试剂说明书的裂解液用量，以下给出我公司提供的可完美替换TRIZOL的TRIcom试剂用量作为参考。

a. 组织

动物组织：每30~50mg组织加1ml的TRIcom。裂解之后需要离心去除不溶的组织，然后将上清移置到一个RNase-free的离心管内进行下面的样品纯化步骤。

植物组织：每50~100mg组织加1ml的TRIcom。裂解之后需要离心去除不溶的组织，然后将上清移置到一个RNase-free的离心管内进行下面的样品纯化步骤。

b. 单层生长的细胞

单层贴壁细胞的收集（收集细胞数量请不要超过1×107 ）：可直接在培养容器中裂解（容器体积不超过10cm2），或者使用胰蛋白酶处理后离心收集细胞沉淀。（在摇瓶中培养的单层贴壁细胞通常采用胰蛋白酶处理的方法）。

1) 直接裂解法：直接在培养板中加入RNApure裂解细胞，每10 cm2面积加入1 ml TRIcom。用取样器吹打几次。

2) 胰蛋白酶处理法：确定细胞数量，吸除培养基，用PBS洗涤细胞，吸除PBS，向细胞中加入含有0.1-0.25%胰蛋白酶的PBS处理细胞，当细胞脱离容器壁时，加入含有血清的培养基失活胰蛋白酶，将细胞溶液转移至RNase-free 的离心管中，300×g 离心5 分钟，收集细胞沉淀，仔细吸除所有上清。去除液体培养基后，直接往培养板中加入RNA裂解液溶解细胞，并用移液枪轻轻吹打混匀。依据细胞的数量来决定所需的RNA裂解液量（105细胞以内加100ul, 106细胞加300ul）。

c. 悬浮生长的细胞

离心沉淀细胞(≤500 ×g)，完全去除上清后用RNA裂解液重悬细胞沉淀。可短暂涡旋振荡。

d. 细胞悬液

离心取细胞。每 5×10⁶－10⁷ 动物、植物和酵母细胞或每107细菌细胞加入1 ml TRIcom。加入TRIcom 前不要洗涤细胞，以免降解 mRNA。一些酵母和细菌细胞可能需要匀浆仪处理。

e. 添加保护剂的样品

离心沉淀细胞，取上清200 ul,添加200 ul等体积的TRIcom。

(II)RNA提取

1. 加入等体积(95-100%)的无水乙醇到上一步TRIcom或TRIZOL裂解液中混匀（如果有未裂解完全的沉淀需要离心取上清部分操作）。

2. 取振荡混匀的磁珠 20μl 添加到上述混合物中，用枪头混匀或者放在振荡器上振荡10-15 分钟。

3. 将管子转移到一个磁力架上，直到磁珠沉淀下来，吸弃上清液。将管子从磁力架上移走。

4.添加 500μl 磁珠 DNA/RNA 洗涤液 1 到样品中混匀。

5. 将管子转移到一个磁力架上，直到磁珠沉淀下来，吸弃上清液。将管子从磁力架上移走。

6. 添加 500μl 磁珠 DNA/RNA 洗涤液 2 到样品中混匀。

7. 将管子转移到一个磁力架上，直到磁珠沉淀下来，吸弃上清液。将管子从磁力架上移走。

8. 添加 500μl 乙醇（95%-100%）到样品中混匀。

9. 将管子转移到一个磁力架上，直到磁珠沉淀下来，吸弃上清液。将管子从磁力架上移走。

10. 重复步骤 8,9。

11. 将管子移到一个加热模块上（55℃）直到磁珠变干（大概 10 分钟），如果没有加热模块，可以在室温下放20-30 分钟自然晾干。（避免过度干燥影响磁珠的洗脱效率） 。

12. 添加 50μl 的无 DNA 酶 RNA 酶的水到管中重悬磁珠，混匀磁珠 10 分钟，然后将管子移到一个磁力架上，放置2-3 分 钟直到磁珠完全沉淀下来。将上清（RNA）转移到一个干净的管子内。

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