Solarbio索莱宝Bradford法蛋白浓度测定试剂盒(PC0010-100T)

产品介绍：

考马斯亮兰G-250染料，在酸性溶液中与蛋白质结合，使染料的最大吸收峰的位置（Imax），由465nm变为595nm，在一定的浓度范围内，测定的吸光度值A595与蛋白质浓度成正比。Bradford法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响，样品中巯基乙醇的浓度可高达1M，二硫苏糖醇的浓度可高达5mM，但受略高浓度的去垢剂影响，需确保SDS的浓度低于0.1%，Triton X-100低于0.1%，Tween 20, 60, 80低于0.06%。含去垢剂的样品推荐使用索莱宝生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒。

产品属性：

储存条件：BSA-20℃保存，其它试剂4℃。

有效期:1年。

操作说明（仅供参数）：

一．微孔酶标仪法

1.完全溶解蛋白标准品，取 10μL，稀释至 250μL ，使终浓度为 0.2mg/mL。待测蛋白样品在什么溶液中，标准品也宜用什么溶液稀释。但是为了简便起见，也可以用 0.9%NaCl 或 PBS 稀释标准品。

2.5×G250 染色液使用前请颠倒 3-5 次混匀，取 1mL 5×G250 染色液，加入 4mL 双蒸水，混匀成 1×G250 染色液，此 1×G250 染色液可在 4℃保存一周。

3. 将标准品按 0、2、4、6、8、12、16、20 微升分别加到 96 孔板中，加 PBS 稀释液补足到 20 微升。

4.将样品作适当稀释（最好多做几个梯度，如作 2 倍、4 倍、8 倍稀释），加 20 微升到 96 孔板的样品孔中。由于移液器在取小量时的误差，标准线前面的点可能不很准确，所以尽可能的让样品点落在标准线 1/2 后。

5.各孔加入 200 微升稀释后的 1×G250 染色液，室温放置 3-5 分钟。

6.用酶标仪测定 A595，或 560-610nm 之间的其它波长的吸光度。

7. 根据标准曲线计算出样品中的蛋白浓度

二．分光光度计法如无酶标仪，染色反应可在离心管中进行，反应液混匀后加入比色皿中，使用分光光度计测定吸光值。步骤如下：

1. 取八支（或者更多）干净的 10mL 离心管，标记上号。

2. 取 100μLBSA 加入 PBS 2.4mL 稀释至终浓度为 0.2mg/mL。

3. 5×G250 染色液使用前请颠倒 3-5 次混匀，取 10mL 5×G250 染色液，加入 40mL 双蒸水，混匀成 1×G250 染色液，此 1×G250 染色液可在 4℃保存一周。

4. 按下表加入试剂(以每孔 5mL 计，多余的用来清洗比色皿)

微信图片_20240221113244.png 5. 反应 3 分钟后测 OD 值。为了实验的准确性，可每间隔 2 分钟加一管染色液，每间隔 2 分钟测一管 OD 值。如下表

微信图片_20240221113427.png

此图为伯乐酶标仪 680，单波长，570nm 测得。室温反应三分钟。

产品订购：

货号	产品名称	规格
PC0010-100T	Bradford法蛋白浓度测定试剂盒	100T