BioDynami Methylation Specific Bisulfite Seq建库试剂盒——illumina平台(30101/30102/30103)

产品简介：

亚硫酸氢盐测序(Bisulfite seq)是一种众所周知的DNA甲基化检测技术，WGBS、RRBS、MeDIP-Seq和MSBS等技术被用于全基因组DNA甲基化分析。DNA甲基化在分子生物学、遗传学和表观遗传学中对细胞发育、分化和基因表达的调控具有重要意义。大多数甲基化胞嘧啶位于CpG位点，70-80%的胞嘧啶发生甲基化。人类基因组中CpG位点的数量约为2800万个，不到基因组的1%，而预期为4.4%。

全基因组亚硫酸氢盐测序(WGBS)是目前最有效的DNA甲基化分析方法。唯一的限制是测序成本非常高，因为全基因组测序包括所有非甲基化区域。

还原重亚硫酸盐测序(RRBS)是甲基化CpG位点的一小部分还原。RRBS结合了限制性内切酶消化和亚硫酸氢盐测序，丰富了甲基化CpG位点的测序。它是一种在单个碱基水平上评估全基因组甲基化模式的有效技术。虽然这允许了更高的覆盖深度并降低了测序成本，但限制是只有10%的甲基化CpG位点被覆盖。

甲基化DNA免疫沉淀测序(Methylated DNA Immunoprecipitation Sequencing, MeDIP-Seq)是另一种用于选择甲基化DNA的全基因组富集技术。利用抗5-甲基胞嘧啶抗体，通过免疫沉淀从全基因组DNA中富集甲基化DNA。5-甲基胞嘧啶抗体与基因组片段DNA孵育并沉淀，随后进行DNA纯化和测序。MeDIP-Seq有几个缺点：1.相对于单基分辨率，低分辨率(150~200 bp)；2. 由于抗体特异性和选择性的非特异性相互作用。3.偏向于高甲基化区域。

BioDynami开发了BioDynami Methylation Specific Bisulfite Seq建库试剂盒(illumina平台)，以亚硫酸氢盐处理的DNA (20 ng - 500 ng)为输入，构建甲基化CpG位点的NGS文库。试剂盒富集了甲基化的CpG区域，从而显著降低了测序成本。该试剂盒基于亚硫酸氢盐测序技术，在单个碱基水平上估算全基因组甲基化模式。

亚硫酸氢盐处理完成的NGS库会对库造成巨大的破坏。通过使用亚硫酸氢盐处理过的DNA作为输入，该试剂盒克服了由于亚硫酸氢盐转化而造成的重大文库损失。该试剂盒包含PCR聚合酶的混合物，具有高保真扩增和尿嘧啶耐受性，是亚硫酸氢盐处理DNA的理想选择。

BioDynami Methylation Specific Bisulfite Seq建库试剂盒工作流程

试剂盒有三种index类型：

Non-index(Cat.# 30101)：没有索引。

Index(Cat.# 30102)：每个引物包含6个碱基的唯一序列，用于识别单个库。库复用能力可达48个样本。

Unique dual index(Cat.# 30103)：重亚硫酸氢盐测序文库复用多达96个样本，具有独特的双指标。BioDynami使用了一个Four-Base Difference Index System来生成在8基指数中至少有4个不同的指数。索引引物消除了NGS的错误，包括索引交叉污染、索引跳跃、读取错误赋值等。

产品优势：

★  甲基化CpG位点的富集

★  单碱基分辨率

★  测序成本低

★  迅速

★  工作流程简单

★  亚硫酸氢盐处理的DNA作为输入：从20 ng到500 ng

★  总时间：1.5小时

★  操作时间：10分钟

MSBS文库准备试剂盒丰富了CpG位点

人类基因组中的高甲基化区域和低甲基化区域

人类基因组中的高甲基化区域

人类基因组中的低甲基化区域

测序设置：推荐单端35个周期(读取1,35个碱基)

为了最大限度地提高甲基化CpG的富集，我们建议用单末端35个循环(read1,35个碱基)对MSBS文库进行测序。这是因为富集的甲基化CpG位点主要位于read 1序列的开头附近。单端reads越短，甲基化CpG富集越好。

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