PRECEDO乳腺癌3D类器官培养基(PRS-BCM-3D)

产品简介：

乳腺癌3D类器官培养基（Breast Carcinoma Organoid Medium）是一款促进乳腺癌类器官体外形成和扩增的培养基。该产品为无菌的液体混合系统，含有维持目的细胞生长所必需的氨基酸、维生素、有机和无机化合物和生长因子等。该培养基的独特配方可以提供一个合适的细胞所需营养环境，选择性地促进人乳腺癌类器官的体外生长和扩增。
产品优势：
(1) 培养成功率高

▲乳腺癌类器官镜下明场照片

(2) 体外持续扩增

▲乳腺癌类器官生长曲线

(3) 保持肿瘤特征

▲乳腺癌类器官荧光照片

(4) 药敏结果与临床数据接近

▲乳腺癌类器官药敏结果

产品说明：
一、实验前准备
（1）提前将24孔细胞培养板置于37℃的培养箱中预热过夜。
（2）将15mL无菌离心管、1.5mLEP管、移液器、移液管、无菌枪头等表面消毒后放入超净工作台中紫外照射30min。
（3）提前30min从4 ℃冰箱取出乳腺癌类器官培养基平衡至室温。

（4）提前从-20℃冰箱取出所需体积的细胞外基质胶冰上融化。

（5）配置含1%BSA的DMEM培养基冰上预冷备用。
二、乳腺癌类器官培养
（1）将取自乳腺癌患者的样本进行分离和消化，消化后的细胞悬液进行计数。
（2）按每孔1~2×10⁴个细胞密度计算所需细胞数，根据计算好的体积吸取细胞悬液加入预冷的1.5mL离心管中，离心，弃上清，将细胞沉淀置于冰上。
（3）按1∶2体积比，将一份体积的含1%BSA的DMEM加入2份体积的的细胞外基质胶中，轻轻混匀（全程冰上操作），然后在冰上将配好的基质胶混合液与细胞沉淀充分混匀。
（4）将细胞沉淀与基质胶的混合液按照35μL/孔滴在已提前预热好的24孔板中央，使之形成圆顶状胶滴。缓慢将细胞培养板移至培养箱至少30分钟。
（5）待基质胶完全凝固，沿24孔壁缓慢加入1mL/孔预先恢复至室温的本类器官培养基，并将培养板置于37℃，5%CO₂条件下静置培养。
（6）镜下观察类器官形成情况，每3~4天更换一次培养基。
三、乳腺癌类器官收集
（1）弃去培养基，用基质胶解离试剂润洗枪头后，每孔加入1mL该试剂，静置1min。
（2）用基质胶解离试剂润洗枪头后，吸取孔内液体，轻轻吹打圆顶状胶滴表面，将胶滴吹散，并将吹散后的含类器官的混合液收集至15mL离心管中。
（3）重复一次上述操作，将两次洗脱下来的类器官合并收集于同一15mL离心管中。
（4）37℃，75rpm水平摇床上解离10min（具体解离时间根据实际情况决定，以无明显大块胶状物为准）。
（5）10分钟后在4℃下，300g，离心5min，小心吸弃上清，沉淀待用。

四、乳腺癌类器官传代
（1）收集好的细胞沉淀（以无肉眼可见基质胶状沉淀为准）加入预冷的含1%BSA的DMEM培养基重悬，在4℃下，300g，离心5min。
（2）小心吸弃上清，沉淀用含1%BSA的DMEM培养基重悬计数。
（3）按照培养步骤操作，以大约1000个类器官/孔密度重新接种类器官，继续扩大培养。

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