PRECEDO食管癌3D类器官培养基(PRS-ECM-3D)

产品简介：

食管癌3D类器官培养基（ESophaqus Carcinoma Organoid Medium）是一种为促进食管鳞癌类器官体外形成和扩增而设计的培养基。它是一种无菌的液体混合系统，含有必需和非必需的氨基酸、维生素、有机和无机化合物、激素、生长因子、微量矿物质等。该培养基的独特配方可以提供一个最适的食管鳞癌类器官扩增所需营养环境，选择性地促进体外人食管鳞癌类器官的生长。

产品优势：
(1) 培养成功率高

▲食管癌类器官镜下明场照片

(2) 体外持续扩增

▲食管癌类器官生长曲线

(3) 保持肿瘤特征

▲食管癌类器官荧光照片

(4) 药敏结果与临床数据接近

▲食管癌类器官药敏结果

产品说明：

一、实验前准备
（1）消化好的食管癌原代细胞悬液。
（2）15mL无菌离心管、1.5mL离心管、24孔细胞培养板、移液器、移液管、无菌枪头等表面消毒后放入超净工作台中紫外照射30 min。
（3）提前30 min从4℃冰箱取出食管癌类器官培养基平衡至室温，提前从-20℃冰箱取出所需体积的基质胶冰上融化。

二、食管癌类器官培养
（1）将消化好的食管癌细胞悬液计数，按照1-2万细胞每孔计算所需的细胞数，根据计算好的体积吸取细胞悬液加入预冷的1.5mL离心管中，补齐预冷的DMEM/F12至所需体积。
（2）将预冷后的细胞悬液加入等体积的基质胶中轻轻混匀（全程冰上操作），然后将细胞与基质胶的混合液按照40μL/孔接种于24孔板。
（3）将接种好的培养板放入培养箱至少30 min，待基质胶完全凝固，然后沿24孔壁每孔缓慢加入500μL预先恢复至室温的类器官培养基，3天后镜下观察类器官形成情况，粒径大于50μm即认为类器官已经形成。
（4）每5天更换一次培养基进行培养，持续观察类器官大小，镜下观察大部分类器官大小均大于50μm且大小不再增大即可收集类器官进行后续实验。

三、食管癌类器官收集
（1）吸去培养基，每孔加入200μL基质胶解离试剂，轻轻吹打混匀，收集至15mL离心管中。
（2）37℃解离30min（具体解离时间根据实际情况决定，以无明显大块胶状物为准），解离之后1500rpm离心3min，轻轻吸去上清，待用。

四、食管癌类器官传代
（1）解离之后的细胞加入适量的消化酶，37℃，200rpm消化（具体时间根据类器官大小和数量决定，以无肉眼可见颗粒为准）。
（2）消化完全后1500rpm离心3min，轻轻吸去上清，使用终止培养基重悬后1500rpm离心3min，加入预冷的DMEM/F12培养基进行重悬，计数，按照培养步骤操作继续培养。

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