荧光素是一种常见的生物发光报告物，用于对荧光素酶的表达进行体内成像。这种萤火虫荧光素酶的水溶性底物利用ATP和Mg²⁺作为辅助因子，在有氧的情况下发出特征性的黄绿光，在37°C的活体环境中转变为红光。通过利用ATP，该反应可进一步用于指示能量或生命的存在，从而起到生死染色的作用。

D-荧光素钾盐是生物技术领域常用的试剂，特别适用于体内成像。通常会将荧光素酶标记的肿瘤细胞、干细胞或传染性疾病接种到大鼠或小鼠等研究动物体内进行研究。注射D-荧光素钾盐后，可通过生物发光成像(BLI)对这些模型系统中的疾病进展和/或药物疗效进行实时、非侵入性监测。

本文主要介绍D-荧光素钾盐体内成像检测的使用说明。

一、D-荧光素钾盐的配制

（一）所需材料

·D-荧光素钾盐

·DPBS（不含Ca²⁺、Mg²⁺）

·0.2 µm注射器过滤器

（二）D-荧光素钾盐配制

1.在室温下解冻D-荧光素（钾盐或钠盐）并溶解在DPBS（不含钙、镁）中，最终浓度为15 mg/mL。

2.使用5-10 mL无菌H₂O预湿0.22 µm过滤器，然后倒掉水。

3.利用准备好的0.22 µm注射器过滤器对荧光素溶液进行灭菌。

二、D-荧光素钾盐体内成像检测流程（以小鼠腹腔IP注射为例）

1.固定小鼠并倾斜，使头部朝下，腹部暴露。

2.用70%乙醇彻底消毒注射部位。

3.建议使用25-27号针头进行腹腔注射。将针头以约30度角插入腹部。

4.针头杆应插入约半厘米（4-5 mm）的深度。

5.稍微抽吸以确保针头没有刺穿血管、肠道或膀胱。

a.绿褐色抽吸物表示针头刺穿肠道。

b.黄色抽吸物表示针头刺穿膀胱

6.如果抽吸出任何液体，则溶液已被污染，必须丢弃并使用新的注射器和针头重复上述步骤。

7.如果没有抽吸出液体，则可以继续注射。

8.拔出针头，等待10-20分钟再进行成像以获得最大荧光素酶信号平台期。（具体的信号峰值时间需要进行预实验确定。）

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