制备高质量的单细胞悬液，是成功进行单细胞实验的首要前提。那如何用血管组织解离试剂盒来制备单细胞悬液呢？让我们一起来看看吧！

步骤一：选择适合的消化试剂

血管组织解离试剂盒是采用酶消化法对血管组织进行解离消化，成功的化解了血管组织难以解离的难题，助力单细胞悬液的制备。

步骤二：单细胞悬液制备流程（以一般的哺乳动物组织为例）

1、用灭菌的剪刀或手术剪将血管组织切成小块。

2、在冰上将血管组织块儿加入适当的RPMI 1640培养基或PBS缓冲液，清洗至少3次，去除多余血渍和杂质。

3、将洗干净的血管组织剪碎，剪的越碎越好，增大和消化试剂接触的面积。加入适量的消化试剂。颠倒混匀。

4、在37℃下进行孵育，每隔5分钟震荡混匀。

5、不同类型、状态的组织消化时间不同，每隔一定的时间质检一次细胞悬液，根据细胞总量及活性等确定消化停止时间。对于某些肿瘤组织或其他较致密结缔组织，消化时间4~48h， 对于容易消化的组织可以采用37℃ 消化15-45分钟，也可以根据具体情况而定。如组织块已分散而失去块的形状，一经摇动即成细胞团或单个细胞，可以认为已消化充分。

6、消化完成后，用合适的细胞筛进行过滤，收集滤液。

7、让细胞沉降并倒出多余的含酶液体。

8、用PBS缓冲液洗涤并重复2-3次。加入适当的培养基或缓冲液，重悬细胞。

9、用细胞计数仪对细胞悬液进行质控并记录。

注：若得到的细胞悬液中红细胞、碎片和死细胞过多，按需决定是否进行相应的去除操作。

注意事项：

1、清洗和重悬时可以选择用含5% FBS的PBS缓冲液。

2、用细胞筛进行过滤时，初步可选用70μm的细胞筛，视质检的情况而定，碎片过多可以继续过40μm的细胞筛。

3、解离后的细胞悬液可以进行下一步实验，或者加入适当体积的细胞冻存液，放入平衡至室温的程序性冻存盒梯度冻存至-80℃冰箱。

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