MLPA，名为：多重连接探针扩增技术，英文为：Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification,是一种高通量、‌针对待测核酸中靶序列进行定性和定量分析的检测技术。MLPA技术是2002年由荷兰学者Dr. Schouten提出，‌并由MRC-Holland公司开发，深受实验室的喜欢，那让我们一起来看看MLPA的技术原理吧！

在MLPA实验中，纯化的样本DNA被变性。随后用MLPA探针寡核苷酸孵育过夜。每个MLPA探针都具有针对特定基因组序列的探针。MLPA探针由两部分组成:左探针和右探针寡核苷酸(LPO和RPO)。LPO和RPO包含PCR引物和DNA杂交序列。RPO中的附加填充序列为每个探针提供了唯一的长度。

在MLPA反应中，左探针寡核苷酸（LPO）和右探针寡核苷酸（RPO）都与靶序列进行杂交，之后使用连接酶连接两部分探针。

将杂交的探针寡核苷酸连接到邻近的目标序列。连接部位周围不允许有错配，使连接反应具有高度特异性。探针连接产物的数量是样品中目标序列数量的度量。

使用单个通用引物对在多重PCR中扩增连接的探针。只有连接的探针呈指数级扩增，使得不需要去除未连接和未连接的探针。

再通过毛细管电泳进行片段分离，通过MRC Holland的Coffalyser.Net分析软件进行分析得出结论。PCR产物装载到毛细管电置上，按长度分离。每个片段对应一个特定的MLPA探针。

MLPA技术主要应用于检测基因拷贝数的缺失或重复、甲基化状态、SNP位点等，如智力低下综合征、X连锁型智力低下、假肥大型肌营养不良症、Prader-Willi综合症等。

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