2022年2月，国家癌症中心发布了最新一期的全国癌症统计数据。研究人员预测，2022年，中国将新发癌症约482万例，321万人因癌症而死亡。肺癌仍是最常见的新发癌症，也是导致死亡的最主要癌症。肺癌是临床精准医疗研究较为成熟的一种疾病，目前已找到一系列相关的疾病驱动基因，如EGFR、ALK、ROS1等，并开发出了相应的靶向药物，如吉非替尼、西妥昔单抗等。虽然靶向药物治疗比传统化疗效果更好，但只有携带特定分子遗传标记的人群才可从中受益。肺癌类器官是一种利用来源于肺癌病人自身的肺癌细胞，在体外培养出来的肿瘤细胞类型，它能作为替身，为患者试药，进行化疗药、靶向药、新型抗肿瘤抗体药等药物敏感性检测，辅助医生制定个体化治疗方案，有效提高治愈率。

一、实验前准备

（1）消化好的肺癌原代细胞悬液。

（2）15mL无菌离心管、1.5mL离心管、24孔细胞培养板、移液器、移液管、无菌枪头等表面消毒后放入超净工作台中紫外照射30min。

（3）提前30min从4℃冰箱取出肺癌类器官完全培养基平衡至室温，提前从-20℃冰箱取出所需体积的基质胶冰上融化。

二、肺癌类器官培养

（1）将消化好的肺癌细胞悬液计数，按照1-2万细胞每孔计算所需的细胞数，根据计算好的体积吸取细胞悬液加入预冷的1.5mL离心管中。

（2）补齐预冷的DMEM/F12培养基至所需体积，将预冷后的细胞悬液加入等体积的基质胶中轻轻混匀（全程冰上操作），然后将细胞与基质胶的混合液按照40μL/孔接种于24孔板。

（3）将接种好的培养板放入培养箱至少30min，待基质胶完全凝固，然后沿24孔壁每孔缓慢加入500μL预先恢复至室温的类器官完全培养基。

（4）3天后镜下观察类器官形成情况，粒径大于50μm即认为类器官已经形成，每5天更换一次培养基进行培养，持续观察类器官大小，镜下观察大部分类器官大小均大于50μm且大小不再增大即可收集类器官进行后续实验。

三、肺癌类器官收集

（1）吸去培养基，每孔加入200μL基质胶解离试剂。

（2）轻轻吹打混匀，收集至15mL离心管中，37℃解离30min（具体解离时间根据实际情况决定，以无明显大块胶状物为准），解离之后1500rpm离心3min，轻轻吸去上清，待用。

四、肺癌类器官传代

（1）解离之后的细胞加入适量的消化酶37℃，200rpm消化（具体时间根据类器官大小和数量决定，以无肉眼可见颗粒为准）。

（2）消化完全后1500rpm离心3min，轻轻吸去上清，使用终止培养基重悬后1500rpm离心3min，加入预冷的DMEM/F12培养基进行重悬，计数，按照培养步骤操作继续培养。

注意事项：

（1）本产品在使用前需平衡至室温。

（2）使用产品时应注意无菌操作，避免污染。

（3）为保持本产品的最佳使用效果，不宜将其过夜放置于室温或较高的温度环境中。

（4）样本需为肺癌术中样本，且肿瘤细胞比例越高（至少>50%），培养成功率越高，不推荐用于少量样本（如穿刺或者循环肿瘤细胞）的培养。

（5）请于保质期内使用本产品，超出保质期，必须放弃使用。

（6）本产品仅用于科研用途，不能用于体外诊断。