产品说明：肠癌3D类器官培养基（Intestine Carcinoma Organoid Medium）是一种为促进人源肠癌类器官体外形成和扩增而开发的培养基。它是一种无菌的液体混合系统，含有必需和非必需的氨基酸、维生素、有机和无机化合物、激素、生长因子、微量矿物质等。该培养基的独特配方可以提供一个最佳人源肠癌类器官体外培养环境，选择性地促进体外人源肠癌类器官的生长。
产品优势：

(1) 培养成功率高

▲肠癌类器官镜下明场照片

(2) 体外持续扩增

▲肠癌类器官生长曲线

(3) 保持肿瘤特征

▲肠癌类器官荧光照片

(4) 药敏结果与临床数据接近

▲肠癌类器官药敏结果

使用说明：

◉ 实验前准备
（1）15mL无菌离心管、1.5mL离心管、24孔细胞培养板、移液器、移液管、无菌枪头等表面消毒后放入超净工作台中紫外照射30 min。
（2）提前30min从4℃冰箱取出肠癌类器官培养基平衡至室温，提前1h从-20℃冰箱取出所需体积的基质胶冰上融化。
◉ 肠癌类器官培养
（1）将获取的肠癌原代细胞悬液计数，根据计算好的体积吸取细胞悬液加入预冷的1.5mL离心管中，补齐预冷的肠癌类器官培养基至所需体积。
（2）将预冷后的细胞悬液加入等体积的基质胶中轻轻混匀（全程冰上操作），避免气泡，使肠癌原代细胞终浓度为5×105个细胞/毫升。然后将细胞与基质胶的混合液按照50uL/孔呈半球形点胶于24孔板。

（3）将培养板放入5%CO2、37℃培养箱终至少30min，待基质胶完全凝固。沿孔壁每孔缓慢加入500μL预先恢复至室温的类器官培养基，放置5%CO2、37℃培养箱培养。

（4） 3天后镜下观察类器官形成情况，粒径大于30~50μm即认为类器官已经形成。
（5）每5天更换一次培养基进行培养，持续观察类器官大小，镜下观察大部分类器官大小均大于30~50μm且大小不再增大即可收集类器官进行后续实验。
◉ 肠癌类器官收集

（1）弃培养基，每孔加入200μL基质胶解离试剂，室温放置1min，轻轻吹打混匀，收集至15mL离心管中。

（2）50rpm恒温震荡解离10-20min，解离之后1500rpm离心3min，轻吸去上清，待用。

◉ 肠癌类器官传代
（1）收集的类器官，加入适量的消化酶，37℃，200rpm消化（具体时间根据类器官大小和数量决定，以肉眼可见颗粒明显减小一半为准，可中间取消化的类器官显微镜观察，类器官消化至3~10个细胞集合体最佳）。
（2）消化完全后1500rpm离心3min，弃上清，使用清洗液重悬后1500rpm离心3min；加入预冷的肠癌类器官培养基进行重悬，计数，按照培养步骤操作继续培养。
注意事项：
1. 本产品在使用前需平衡至室温。
2. 样本需为肿瘤组织，且肿瘤细胞比例越高（>50%），类器官培养成功率越高。

3. 使用产品时应注意无菌操作，避免污染。
4. 为保持本产品的最佳使用效果，不宜将其过夜放置于室温或较高的温度环境中。

5. 类器官培养过程要轻柔，避免基质胶凝固后散胶。
6. 请于保质期内使用本产品，超出保质期，必须放弃使用。
7. 本产品仅用于科研用途，不能用于体外诊断。