感受态细胞制备目前常用的方法有传统的Cacl₂法和电转化法，电转化法比较Cacl₂法具有操作简便，转化效率高的优势，本文将介绍电转感受态细胞的原理，制备方法与注意事项。

一、电转感受态细胞原理

电转感受态细胞的原理是利用高强度电场作用下，细胞膜通透性增加，使得带电的分子（如DNA）能够更容易地通过细胞膜进入细胞内部。电转感受态细胞技术相比传统转染技术，具有高效、快速、简便等优点，且对细胞的毒性较小。

二、电转感受态细胞制备方法（以DH10B-Plus电转感受态细胞为例）

1.取适量SOC培养基于37℃预热1-2小时(每管感受态准备10mL SOC培养基)

2.0.1cm电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上5分钟沥干水分，正置5分钟，待乙醇挥发干净立即插入冰中，压实冰面，电击杯顶离冰面0.5cm 以方便盖上杯盖，冰中静置5分钟充分降温。

3.取-80℃保存的DH10B-Plus电转感受态细胞插入冰中5分钟，待其融化，加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手拨打EP管底轻轻混匀，避免产生气泡，立即插入冰中。

A.测定转化效率使用1 μl 0.1ng/μl的对照质粒pUC19；

B.对于连接产物，部分公司的T4连接酶体系或重组体系可与电击感受态混合后电击转化，无需进行DNA纯化，但DNA浓度不能过高，DNA浓度不超过100 ng/μl，体积不超过5 μl/50 μl 感受态。

C.对离子浓度较高的DNA溶液或反应体系请用膜纯化或乙醇沉淀法纯化DNA，ddH₂O溶解后电击转化。

4.用200 μl枪头(用刀切除0.5cm枪尖)将感受态-DNA混合物快速移到电击杯中（避免产生气泡），轻轻晃动使液面保持水平状态，盖上杯盖，插入冰中。

5.启动电转仪，设置参数：C=25 μF，PC=200 Ω，V=1.8 kV，将电击杯从冰中拿出，用吸水纸擦拭表面，吸干表面水渍，放入电转槽中，电击完成后拿出电转杯放室温，打开杯盖，15秒内加入0.9 ml预热的SOC(此步骤可在电转仪旁操作，无需在超净台操作)，用1ml枪吹吸电击杯底部2-3次，混匀后转移到50 ml离心管，向离心管中补加SOC培养基至10 ml。37℃，225 rpm复苏60分钟。

6.5000 rpm离心一分钟收菌，重悬后取100-200 μl涂布到含相应抗生素的S.O.C 平板上（因菌量较大，若全部涂板请选用直径15cm培养皿2-5个）。将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养13-17小时。

三、电转感受态细胞制备的注意事项

1.加入DNA 时体积不应大于感受态体积的1/10，电击感受态细胞加入电击杯应避免产生气泡气泡会增加弧光放电风险。

3.DH10B-Plus 菌株有链霉素和四环素抗性，不可用于具有链霉素或四环素抗性质粒的转化。

4.当DNA不纯或存在盐，乙醇，蛋白及缓冲液等污染时，转化效率急剧下降。

5.混入质粒时应轻柔操作，吸取感受态细胞时避免用力过猛，以免损伤细胞膜，降低转化效率。转化高浓度的质粒或连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。

北京百奥创新可提供一系列感受态细胞，了解更详细内容，欢迎咨询百奥创新。