间充质干细胞（Mesenchymal Stem Cells, MSCs）是一种多能干细胞，源于间叶组织，具有高度的自我更新能力和多向分化潜力。它们可分化为骨、软骨、脂肪、肌肉和神经等多种细胞类型，因而在再生医学、组织工程和基因治疗等领域具有广泛的应用前景。

本文主要介绍使用人间充质干细胞高效扩增试剂盒对间充质干细胞体外培养，具体方法如下：

（一）人间充质干细胞无血清完全培养基的配制

将试剂盒中的培养基添加剂A从-20°C 冰箱中取出，置于室温中完全溶解，与添加剂B全量加入到干细胞基础培养基中，混匀后即可使用。

注意：1）完全培养基可在2-8℃中避光保存4周；

2）使用时，提前室温平衡30 min；

3）不可多次反复复温，可取出适量复温使用。

（二）人间充质干细胞的传代培养（以T75瓶为例）：

1.当间充质干细胞的融合度达到90%时，即可传代；

注意：切勿使细胞融合度过高，否则易导致局部位置有细胞球生成，甚至细胞成片脱落。

2.传代前，PBS和胰酶室温平衡；

3.超净台中，吸去培养瓶中的培养液，加入10mL PBS于T75瓶中，轻轻晃动洗涤细胞后吸去PBS，共洗涤两次；

注意：1）需将培养液清洗干净，否则会造成后续细胞消化不完全；

2）清洗时，加入PBS要轻柔，可将PBS从细胞培养面的对立面加入，通过晃动的方式洗涤细胞。

4.加入2mL胰酶，轻轻晃动，使胰酶溶液均匀覆盖培养瓶底面。显微镜下，当70-80%的细胞变圆时轻拍培养瓶，而后加入10mL完全培养基或培养液上清进行中和。轻轻吸取瓶内液体反复冲洗瓶底，使细胞完全脱落；

注意：使用胰酶时消化时间不宜过长，以减少胰酶对干细胞的损伤。

5.将细胞悬液转移到15mL离心管中，300g离心10min，小心去除上清，加入2-3mL完全培养基重悬细胞沉淀；

6.将15 mL完全培养基加入到T75瓶中，按1×10⁴个细胞/cm²左右的比例接种，轻轻晃动培养瓶，使细胞分布均匀；

注意：往培养瓶加入完全培养基时，可从培养面的对立面加入，避免直接冲洗培养面；

7.将细胞置于37°C，5% CO₂的细胞培养箱中培养。

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