ELISA（酶联免疫吸附测定）是一项被广泛应用于生物医学和生物化学领域的实验技术，用以检测和定量样品中的抗原或抗体。在进行ELISA实验时，常常会遇到一些问题，那么应该如何解决呢？本文将重点介绍ELISA实验中的常见问题和相应解决方法以及实验时的注意事项。

（一）ELISA实验常见问题及解决方法

1.检测无信号

（1）HRP受到污染

解决方法：使用新配制的试剂

（2）抗体用量不足

解决方法：增加抗体用量或浓度

（3）试剂添加有误

解决方法：重新进行实验

2.高背景信号

（1）洗板不充分

解决方法：增加洗涤次数；确保在洗涤前清除所有残留抗体溶液

（2）封闭不充分

解决方法：延长封闭时间

（3）孵育时间过长

解决方法：缩短孵育时间

（4）链霉亲和素-HRP结合物过量

解决方法：检查偶联物的稀释比例，在推荐的稀释比例下使用

3.重复性差

（1）洗板不充分

解决方法：增加洗涤次数；确保在洗涤前清除所有残留抗体溶液

（2）封板胶纸重复使用

解决方法：每个操作步骤都使用新的封板胶纸

（3）缓冲液受到污染

解决方法：重新配制缓冲液

（4）操作步骤不正确

解决方法：严格按照说明书步骤进行实验

4.样品读数偏高

（1）样品中待测物含量超过标准曲线范围

解决方法：对样品进行稀释

5.样品读数偏低

（1）酶标仪波长设置不正确

解决方法：检查酶标仪波长

（2）显色时间不充分

解决方法：延长显色时间

（3）捕获抗体与板结合能力较差

解决方法：使用不含其他杂蛋白的PBS溶液溶解抗体

（二）ELISA实验注意事项

1.进行ELISA实验时，需要设置阳性对照与阴性对照，同时设置平行实验，以保证实验结果的准确性。

2.ELISA实验的标准品严禁反复冻融。

了解更多有关ELISA实验的问题，欢迎咨询百奥创新。