随着现代分子生物学和免疫学的深入发展,越来越多的实验技术助力疾病的研究。本文介绍了免疫学的八大基础实验的实验技术,让我们一起来看看吧!
免疫学的八大基础实验一:蛋白免疫印迹( Western Blot,WB)
蛋白免疫印迹( Western Blot,WB) 是将蛋白样本通过聚丙烯酰胺电泳按分子量大小进行分离,然后将分离开的蛋白质样品用电转仪转移到杂交膜(blot)上,然后通过一抗/二抗复合物对靶蛋白进行特异性检测的方法。蛋白免疫印迹( Western Blot,WB)可以用于定性和半定量。
免疫学的八大基础实验二:酶联免疫吸附实验(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)
酶联免疫吸附实验(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)是将抗原或抗体结合在固相载体表面,利用抗原抗体的特异性结合以及抗体或者抗原上标记的酶催化特定底物发生显色反应,实现目标物检测的免疫分析方法,可测至皮摩尔(pmol),ELISA可用于测定抗原,也可用于测定抗体。
免疫学的八大基础实验三:免疫组化(immunohistochemistry,IHC)
免疫组化(immunohistochemistry,IHC) 是应用抗原抗体特异性反应原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及相对定量的研究。
免疫学的八大基础实验四:免疫沉淀技术(Immunoprecipitation,IP)
免疫沉淀技术(Immunoprecipitation,IP) 是利用抗体特异性反应纯化富集目的蛋白的一种方法,用于研究蛋白质相互作用、或者蛋白质与遗传物质之间相互作用的经典方法。免疫沉淀技术(Immunoprecipitation,IP)的发展催生了免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,Co-IP)、染色质免疫共沉淀(Chromatin Immunoprecipitation,ChIP)和RNA免疫共沉淀(RNA Binding Protein Immunoprecipitation,RIP)等衍生技术,能够有效反映活细胞内蛋白与蛋白、蛋白与其他生物分子间的生理性相互作用。
(1)免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,Co-IP):利用抗体从样品中捕获靶蛋白及其互作蛋白、复合体的一项技术,能够特异性富集所研究的目的蛋白。
(2)染色质免疫共沉淀(Chromatin Immunoprecipitation,ChIP):研究体内DNA-蛋白质相互作用的分析手段。
RNA免疫共沉淀(RNA Binding Protein Immunoprecipitation,RIP):研究细胞内RNA与蛋白结合情况的技术。
免疫学的八大基础实验五:免疫荧光技术(Immunofluorescence technique,IF)
免疫荧光技术(Immunofluorescence technique,IF) 是将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体(或抗原)上,与其相应的抗原(或抗体)结合后,从而确定抗原或抗体的性质和定位,以及利用定量技术(比如流式细胞仪)测定含量。
分类 | 技术名称 | 英文缩写 | 实验样本 |
细胞免疫荧光 | 细胞免疫荧光 | IF-IC | 悬浮或铁壁细胞 |
组织免疫荧光 | 冰冻切片免疫荧光 | IF-F | 冰冻组织 |
石蜡切片免疫荧光 | IF-P | 石蜡包埋的细胞团或组织 |
免疫学的八大基础实验六:流式细胞术(Flow Cytometry,FCM)
流式细胞术(Flow Cytometry,FCM)用于对悬浮于流体中的微小颗粒进行计数和分选。这种技术可以用来对流过光学或电子检测器的一个个细胞进行连续的多种参数分析。流式细胞术是对悬液中的单细胞或其他生物粒子,通过检测标记的荧光信号,实现高速、逐一的细胞定量分析和分选的技术。
免疫学的八大基础实验七:磁性活化细胞分选法(magnetic-activated cell sorting,MACS)
磁性活化细胞分选法(magnetic-activated cell sorting,MACS)用结合了磁珠的抗体去标记细胞,让目的细胞带上磁珠,通过磁场将结合了磁珠与没结合磁珠的细胞分离开来。
免疫学的八大基础实验八:流式荧光激活细胞分选术(fluorescence-activated cell sorting,FACS)
流式荧光激活细胞分选术(fluorescence-activated cell sorting,FACS)原理与流式分析一致,利用荧光素标记不同的分子,通过调节合适的电压、补偿等,通过荧光将目的细胞与非目的细胞区分开来。
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