zymo试剂盒D4068（Quick-DNA™ Miniprep Plus Kit）是一款简单快速的DNA提取试剂盒，可从细胞培养物、固体组织、唾液和任何生物体液样本中提取高产量总DNA（例如基因组、线粒体、病毒）。试剂盒独有的试剂和Zymo-Spin技术可在35 µl的量内洗脱超纯浓缩基因组DNA（> 50 kb）。Zymo-Spin柱可确保无缓冲液滞留。纯化的DNA不含RNA，无需 RNase A处理，并确保文库制备等应用的准确定量。分离的DNA适合用于敏感的下游应用，包括qPCR、DNA-seq、阵列和甲基化分析。

一、Zymo试剂盒D4068组分

注：1.使用前，向每个Proteinase K（20 mg）管中添加1,040 µl Proteinase K Storage Buffer。Proteinase K的最终浓度约为20 mg/mL。混合后储存于-20ºC。

二、Zymo试剂盒D4068使用流程

（一）样本准备

1.细胞单层样本制备

以下步骤适用于最多5×10⁶个单层细胞。虽然细胞类型和培养条件可能有所不同，但该方案适用于高密度生长细胞（例如HeLa细胞）以及低密度生长细胞（例如神经元细胞）。

用胰蛋白酶消化或从培养瓶或培养板中刮下粘附细胞。以约500 x g的速度离心悬浮液5分钟。去除上清液，将细胞沉淀物重新悬浮在1 ml PBS（磷酸盐缓冲盐水）中，然后将悬浮液转移到微量离心管中。以约500 x g的速度离心悬浮液5分钟。丢弃上清液，后续提取流程按照生物液体和细胞工作流程进行操作。

2.口腔细胞和拭子

口腔细胞可以使用冲洗或拭子分离法分离。

A.冲洗法：用10-20 ml盐溶液或漱口水大力漱口30秒。冲洗动作越剧烈，回收的细胞就越多。将盐水吐入50 ml试管中，以1,500 rpm的速度沉淀细胞5分钟。丢弃上清液，不要扰动细胞沉淀。后续提取流程从生物体液和细胞工作流程的第1步继续进行操作。

B.拭子分离方法：在分离细胞前，用水彻底漱口。用口腔拭子刷脸颊内侧15秒（约刷20次），确保覆盖整个内颊区域。使用200 µl BioFluid & Cell Buffer (Red)和200 µl DNA Elution Buffer或其他等渗溶液的混合物将刷子冲洗到微量离心管中。加入20 µl Proteinase K，充分混合，并在55ºC下孵育10分钟。后续提取流程从生物体液和细胞工作流程的第3步继续（如果需要，稀释或去除样本以减少细胞计数）。

（二）工作流程

使用DNA洗脱缓冲液或等渗缓冲液（例如PBS）重悬培养细胞或大肠杆菌沉淀。对于˂1 x 10⁶个细胞，重悬于100 µl；对于1-5×10⁶个细胞，重悬于200 µl。

A.生物体液和细胞

1.将最多200 µl¹样品加入微量离心管中，并添加：200 µl BioFluid & Cell Buffer (Red)、20 µl Proteinase K。

若样本量˂ 200 µl，按比例减少BioFluid & Cell Buffer (Red)和Proteinase K。

2.充分混合或涡旋10-15秒，然后在55℃下孵育10分钟^2,3。

3.将1倍体积的Genomic Binding Buffer加入消化后的样本中。彻底混合或涡旋10-15秒。

示例：将105 µl Genomic Binding Buffer添加到105 µl消化样本中。

B.固体组织

1.将组织样本（≤ 25 毫克）放入微量离心管中，加入以下试剂：95 µl水、95 µl Solid Tissue Buffer (Blue)、10 µl Proteinase K。

2.充分混合或涡旋10-15秒，然后将管在55˚C下孵育1-3小时或直到组织溶解²。继续操作前充分混合³。

3.将2倍体积的Genomic Binding Buffer加入到上清液中。充分混合或涡旋10-15秒。

示例：将400 µl Genomic Binding Buffer添加到200 µl混合物中。

4.将混合物转移到Collection Tube中的Zymo-Spin™ IIC-XLR柱中。以≥12,000 x g的速度离心1分钟⁴。丢弃流出物和收集管。

5.将400 µl DNA Pre-Wash Buffer添加到新Collection Tube中的旋转柱中。以≥12,000 x g 的速度离心1分钟。清空收集管。

6.将700 µl g-DNA Wash Buffer加入离心柱。以≥12,000 x g的速度离心1分钟。清空收集管。

7.将200 µl g-DNA Wash Buffer加入离心柱中。以≥12,000 x g的速度离心1分钟。丢弃流出物和收集管。

8.将旋转柱转移到干净的微量离心管中。直接在基质上添加≥50 µl DNA Elution Buffer或水⁵。室温下孵育5分钟，然后以最大速度离心1 分钟以洗脱DNA⁶。洗脱的DNA可立即用于基于分子的应用或储存在≤-20ºC以备将来使用。

注：1.如果使用＜50 µl样品，请使用DNA Elution Buffer或等渗缓冲液（例如PBS）将体积增加至50 µl，然后再继续。

2.可以过夜消化而不会影响DNA的完整性。

3.要去除不溶性碎片，请以≥12,000 x g的速度离心1分钟。将水性上清液转移到干净的微量离心管中。避免转移脂质层和沉淀的细胞碎片。

4.如果裂解物在基质顶部仍然可见，请再离心一分钟或直到完全澄清。

5.DNA Elution Buffer：10 mM Tris-HCl，pH 8.5，0.1 mM EDTA。如果使用水，请确保pH > 6.0。

6.用 60-70℃ DNA Elution Buffer洗脱DNA可以提高总产量。另外，第二次上样洗脱液，在室温下孵育3分钟，再次离心也可以提高总产量。

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