免疫组化（IHC）是一种在组织切片或细胞涂片上利用抗体检测抗原并将其可视化的技术。简单来说，它可以检测特定蛋白质在组织中的存在，并利用抗体的高度选择性结合来确定抗原的位置。

（一）免疫组化的结果分析

免疫组化结果分析非常关键。在进行免疫组化实验时，需要遵循三个原则：设立对照、确保抗原表达在正确位置、阴性结果不能代表抗原不表达。

1.设立对照

免疫组化必须设立对照。通常会设立阳性组织对照、阴性组织对照、阴性试剂对照和自身对照。一般来说，一个阳性组织对照和一个阴性组织对照就足够了。阳性对照是使用已知含有抗原的样本做对照来确保实验结果正确，而阴性组织对照则是使用不含抗原的样本做对照，结果应呈阴性。此外，还需要进行空白、替代、吸收和抑制实验。

2.定位

抗原的表达必须在特定位置。如果阳性染色不在预期部位出现，那可能是非特异性染色或者假阳性结果。

3.结果解读

从图上可以看出，只有6和7组实验结果有意义。1～5均因对照组的结果已否定抗体的特异性或因IHC技术操作存在错误等而使实验结果失去意义，必须重复实验或换用抗体。

（二）免疫组化常见问题

1.所有切片呈阳性

（1）切片染色时，抗体浓度过高或者干片；

（2）缓冲液配制不当，未添加氯化钠且pH值不准确，洗涤不够彻底；

（3）使用已变质的显色底物溶液或者显色反应时间过长；

（4）抗体温育时间过长；

（5）过量的H₂O₂导致显色速度过快且粘附剂过厚。

解决方法：缩短抗体温育和显色反应时间，避免切片干燥，添加阴性对照以更好地评估结果。

2.所有切片呈阴性

（1）染色未完全严格按照操作步骤进行

（2）漏加一种抗体或抗体失效；

（3）缓冲液中含叠氮化钠，影响酶活性；

（4）底物中H₂O₂量不足或失活；

（5）复染或脱水剂使用不当。

解决方法：引入阳性对照。阳性结果表明染色和试剂正确，如果待检样本仍阴性则表示真实的阴性，即组织或细胞未表达相应抗原。

3.所有切片背景过深

（1）内源过氧化酶未完全阻断；

（2）切片或涂片过厚；

（3）漂洗不彻底；

（4）底物显色时间过长；

（5）蛋白质封闭不完全或血清溶血；

（6）使用全血清抗体稀释不够。

解决方法：对一些新的或少用的抗体显色时进行观察，避免显色时间过长。

更多有关免疫组化实验的问题，欢迎咨询百奥创新客服。