Elisa实验对初学者而言，实验操作过程中的各个环节都值得重视，作为Elisa小白的你，知道什么是Elisa吗？Elisa的实验原理是什么吗？这份Elisa检测方法大全，请收藏！

一、什么是Elisa？

Elisa，全称为酶联免疫吸附测定法，英文为 enzyme-linked immunosorbent assay，是用于检测微量物质的固相免疫测定方法，是继免疫荧光、放射免疫技术之后发展起来的一种免疫酶技术。自1971年问世以来，发展十分迅速，已成为是免疫学和分子生物学中广泛使用的实验室技术。

二、Elisa的实验原理是什么？

Elisa是利用抗原抗体的特异性反应，结合酶对底物的催化作用，来检测目标物质的含量。测定时，需要将抗原或捕获抗体包被于固相载体上，然后将目标物质与固相载体表面的抗原或抗体结合在一起，通过洗涤将抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开，再加入酶标记的抗原或抗体形成复合物，通过酶催化底物产生颜色反应，将化学信号转换为电信号，通过测量OD值对目标物质进行定量分析。

三、Elisa检测方法大全,请收藏！

1.直接ELISA法

直接ELISA法是将抗原固定在96孔板上，然后用酶标抗体直检测抗原。

直接ELISA法的优点：实验步骤少，检测速度快，不需要用到二抗，避免了交叉反应，测定结果不容易出错。

直接Elisa法的缺点：

（1）背景比较高，由于直接Elisa法的抗原通过吸附而不是特异性固定的，样本中的所有蛋白质（靶蛋白及其他杂质蛋白）都会固定在96孔板上，导致背景比较高。

（2）灵敏度不高，由于直接Elisa法的每种靶蛋白都需要标记与其特异性结合的一抗，实验显得不太灵活；直接Elisa法不使用二抗，没有放大作用，灵敏度降低。

（3）费用相对较高，试验中的一抗都得用酶标记，但不是每种抗体都适合做标记，导致费用较高。

2. 间接Elisa法

在直接Elisa法的基础上，引入二抗建立了间接 Elisa法，由于一抗能结合多个二抗，因此放大了检测灵敏度，同时，一抗不需要标记，只需要加入抗一抗种属的标记二抗就可以进行检测，克服了直接法的局限性。

间接Elisa法的优点：只需要更换不同的固相抗原，就可以用标记二抗检测各种与抗原相结合的抗体，二抗可以加强信号，不加标记一抗就能保留一抗最多的免疫反应性。

间接Elisa法的缺点：存在交叉反应的可能性，抗原纯度不够会导致非特异结合，产生假阳性。

3.Elisa双抗夹心法

Elisa双抗夹心法是将捕获抗体固定在96孔板上，加入样品，通过捕获抗体结合目标抗原，洗去未结合的杂质后，加入酶标检测抗结合目标抗原的另一表位（如果检测抗体不带有标记，则需使用酶标二抗与检测抗体结合，这种称为间接夹心ELISA），形成“sandwich” 的结构，此时的抗原就像被两个面包片夹着的奶油，通过酶催化发生显色反应就可以测定抗原的含量。双抗体夹心法测抗原，对抗原分子上两个不同抗原决定簇的单克隆抗体分别作为捕获抗体和酶标检测抗体。适用于测定二价或二价以上的大分子抗原，不适用于测定半抗原及小分子单价抗原，因其不能形成两位点夹心。

Elisa双抗夹心法的优点：高灵敏、高专一性，抗原无须事先纯化，进行操作时不需稀释，夹心ELISA尤其适用于复杂样品的分析，因为抗原不经纯化仍具能有高灵敏度和特异性。

Elisa双抗夹心法的缺点：抗原分子上需拥有两个不同抗原决定簇，对配对抗体要求很高，如果没有标准化的试剂盒或者已经通过测试的配对抗体，则需要进行配对抗体定制并进行优化，因为降低捕获抗体与检测抗体之间的交叉反应是非常重要的。

4. Elisa竞争法

Elisa竞争法是所有ELISA 里最为复杂的测试方法，通过检测竞争信号的强度来反应样品中的抗原水平，通常以酶标抗原作为竞争抗原，与样品来源的抗原形成直接竞争，抢夺过量的固定化抗体上的结合位点，因此竞争信号越高，说明样品中的抗原越少。Elisa竞争法既可用于检测抗体，也可用于检测抗原。

Elisa竞争法的优点：可用于检测不纯的样品，且数据再现性高，特异性好。

Elisa竞争法的缺点：操作方法更复杂一些，产品性能取决于抗体的亲和力。整体的敏感性和专一性都较差。

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