Southern印迹杂交（又称Southern Blot），一种分子生物学技术，被广泛应用于样本中特定DNA分子的检测和定量。本文详细介绍了Southern印迹杂交的实验原理、所需试剂以及实验操作步骤。

一、Southern Blot原理

通过吸水纸隔着凝胶和膜吸取水时产生的毛细管作用，将DNA分子从凝胶转移至多孔膜上，DNA分子与被标记的核酸探针在膜上进行杂交，从而被检测。

二、实验材料

TAE或TBE电泳缓冲液、电泳级琼脂糖、溴化乙锭或其他DNA染色试剂(如SYBR Green)、2×SSC、20×SSC(3.0 M氯化钠，0.3 M柠檬酸钠)、6×上样缓冲液、DNA marker、预杂交及杂交液(6×SSC，5×Denhardt溶液，0.5% SDS，100mg/mL变性液)、硝酸纤维素或尼龙膜、核糖核酸酶A、限制酶和缓冲液、核酸探针（DNA探针、RNA探针或者寡核苷酸探针）

三、实验步骤

1. 从生物样本（如血液或组织）中提取纯化DNA。

2. 将DNA用限制性内切酶进行消化，得到DNA片段。

3. 电泳：将消化得到的DNA片段通过凝胶电泳，分离不同DNA片段。

注意：为保证DNA均匀分散于加样孔，应缓慢加样。

4. 碱变性：在将DNA片段转移到固体膜之前，将凝胶进行碱变性，配制碱变性溶液后，将凝胶浸于溶液中。

5. 转膜：将DNA片段转移到固体膜(通常是硝酸纤维素或尼龙膜)上，转膜方法一般有三种：毛细管转移法、电转移法、真空转移法。

本文介绍最经典的毛细管转移法(向上转移)，向转印迹槽中加入20×SSC溶液，槽中放置一个固相支持物，按照从下向上的顺序依次加入：两张与凝胶等宽的滤纸(滤纸与固相支持物垂直放于转印迹槽)；底面在上的凝胶；滤膜(与凝胶等大)；滤纸(与凝胶等大)；吸水纸(略小于滤纸，5-8cm高)；400g左右重物用于。将凝胶四周用Parafilm膜包裹以避免短路。

转膜结束后，将滤膜从转印槽中取出，将边角剪下一小角以作标记，浸泡在2×SSC中，随后用吸水纸吸干；可选择紫外交联照射（正面朝上）或者放入80℃的烤箱进行烘烤。

6. 预处理和杂交：将待杂交的滤膜浸泡在SSC缓冲液中，然后将其封装在杂交袋中进行预处理。Southern Blot实验中可使用DNA探针、RNA探针或者寡核苷酸探针。对于探针的标记方法，可选择放射性标记或非放射性标记。根据不同标记的探针进行实验。

7. 洗膜

8. 检测：将滤膜上的残留液吸干，将滤膜用保鲜膜封好，在37℃条件下反应15分钟，然后将滤膜固定在压片夹中，曝光检测。

注意：若采用显色剂进行检测，需新鲜配制显色剂（将45μL NBT和35μL BCIP溶解在10mL 1×检测液中），将滤膜浸泡在显色剂中，避光反应4-16小时，在反应过程中不要移动滤膜。