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EZBioscience microRNA 加尾法逆转录试剂盒

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产品原理：EZBioscience microRNA加尾法逆转录试剂盒的原理是采用聚（A）拖尾反应和逆转录反应的方法，在一步测定中合成miRNA的第一链cDNA。成熟miRNA（来自总RNA）通过使用大肠杆菌聚（A）聚合酶通过添加聚（A）延伸成熟转录物的3'端来修饰。然后，使用Oligo（dT）-通用标签引物对修饰的miRNA进行通用逆转录，以合成所有miRNA的第一链cDNA。

操作步骤：

一、gDNA去除剂对RNA的处理

1.测定RNA的浓度，然后将0.5μg总RNA(含有miRNA)加入到新的无RNase离心管中。加入1μl gDNA去除剂并充分混合（如果混合物的体积小于5μl，则将ddHzO添加到5μl的体积）。在室温（19～27℃）下培养5分钟。

二、聚（A）拖尾与逆转录反应

2.根据下表向gDNA去除剂处理的RNA中添加成分，然后用移液管轻轻混合，并将混合物短暂离心至试管底部。

3.在37℃下进行聚（A）拖尾反应和逆转录反应15分钟，在42℃下进行10分钟，在95℃下进行3分钟。

4.聚（A）拖尾和逆转录反应产物可以是直接用于PCR应用的，但建议在使用前将cDNA稀释并充分混合（具体稀释因子取决于基因表达的丰度。通常，cDNA稀释5~10倍）。如果不立即进行qPCR实验，建议在-80℃下储存，以便长期储存。避免重复冻融循环。

产品优势：

1.无需设计引物：不需要设计额外的逆转录引物，可以在30分钟内获得包含所有miRNA的高质量cDNA。

2.高效快速：该EZBioscience microRNA加尾法逆转录试剂盒采用高效聚（A）聚合酶和逆转录酶的优化组合，可以有效地进行聚（A）拖尾和逆转录反应。与常见的商业逆转录产物相比，该试剂盒以最小的定量CT值逆转cDNA，具有优异的逆转录效率。该试剂盒采用Poly（A）拖尾反应和逆转录反应的方法，一步合成miRNA的第一链cDNA。

3.特异性高：聚（A）聚合酶不仅具有高的A-拖尾效率，而且特异性识别成熟的单链miRNA，从而避免了具有双链结构的miRNA前体的逆转录反应。