PolyPlus转染试剂jetPRIME^®是一种功能强大、用途广泛的DNA和siRNA转染试剂，在日常的转染实验中，产品的结果高效可靠。为了更好的使用该转染试剂，本文汇总了可能存在的各种问题，助您实验一步成功！

问题一：化合物

Q：jetPRIME^®是哪种类型的化合物？

A：jetPRIME^®是由Polyplus-transfection^®公司合成的专利产品，一种新型的基于阳离子聚合物的分子。

问题二：转染原理

Q：使用jetPRIME^®进行转染时，质粒是如何导入的？

A：jetPRIME^®和DNA形成带正电荷的复合物。这些复合物通过内吞作用进入细胞。随后经质子海绵作用，内涵体在细胞质中释放DNA。当有丝分裂过程中核膜消失时，质粒大多到达细胞核。

问题三：血清

Q：我的细胞比较脆弱，无血清时不能生长。我可以尝试在有血清的条件下进行转染吗？

A：与许多其他转染试剂相反，在有血清的环境下，jetPRIME^®的效率更高。因此，转染复合物可以直接加到含血清培养基的细胞中。

无血清培养基：Opti-MEM培养基（thermo）

Lipo2000：转染时需要更换培养为Opti-MEM;需要用Opti-MEM复合物,转染6小时后需要换液。对细胞毒性大。

Lipo3000： 转染时需要更换培养为Opti-MEM;需要用Opti-MEM复合物,转染6小时后无需换液。跟lipo2000相比，毒性小。

问题四：抗生素

Q：jetPRIME^®的转染效率受抗生素影响吗？

A：jetPRIME^®的转染效率不受抗生素的影响。jetPRIME的常规批次质检都是在含血清和抗生素的培养基中进行的。

问题五：细胞密度

Q：细胞密度影响转染效率吗？有推荐的细胞融合度吗？

A： 细胞密度和传代次数将影响转染效率。推荐细胞融合度在60%-80%。对于使用jetPRIME的转染优化条件，请参考jetPRIME^®转染说明书中的Table 1，根据不同培养板推荐的细胞数。此外，如果细胞已经培养很长时间（超过20代），建议从液氮中取新的细胞重新培养。

问题六：比值

Q：DNA/jetPRIME^®的比值是什么意思？

A：该比值指的是每微克（ug）DNA相对应的jetPRIME微升数（uL）。例如，DNA/jetPRIME^®比值为1：2意思是每ug DNA加2uLjetPRIME。

问题七：转染条件

Q：对于给定细胞，能否提供其具体的转染条件？

A：可在网站细胞转染数据库查询具体的转染条件。

问题八：优化

Q：优化的步骤有哪些？

A：优化的第一步是将DNA的量增加1.5倍。也推荐增加DNA/jetPRIME^®比值(每ug的DNA，2-3uLjetPRIME^®)，另一种方法是缓慢离心培养板（5min，210g）

问题九：扩大

Q：DNA的量需要扩大吗？

A：一般来说，DNA的量应该和总细胞数成比例。根据protocol中的推荐，根据不同规格的培养皿，所需要的DNA和jetPRIME的量（Table 2）可调整。

问题十：细胞特异性

Q：对于所有细胞可以使用同样的条件吗？

A：已优化的操作步骤可用于多种细胞，例如A549, MCF7,U2OS, NIH-3T3, B16-F10, Caco-2等。但是，PolyPlus也提供了针对具体细胞的特异性操作步骤，以便获得更高的转染效率。这些具体的条件可以参见网站数据库。

问题十一：HEK-293和HeLa细胞

Q：HEK-293和HeLa细胞：是否可以提供使用jetPRIME转染HEK-293和HeLa细胞的具体建议？

A：jetPRIME对于DNA转染HEK-293 和HeLa细胞都是非常高效的。因此，推荐减少DNA的量（例如6孔板，每孔1ug-0.5ug），使用1：2的DNA和jetPRIME比例。

问题十二：悬浮细胞

Q：jetPRIME^®推荐用于悬浮细胞的DNA转染吗？

A：悬浮细胞，例如T和B淋巴细胞是众所周知的难转染DNA细胞，无论哪种化学方法的试剂都很难有较好的转染效率。因此，通常推荐电转或者病毒转染核酸到悬浮细胞。

问题十三：植物细胞

Q：jetPRIME^®是否测试过可以用于植物细胞的转染？

A：植物细胞富含纤维素的膜阻止了jetPRIME/DNA复合物进入细胞。甚至在脱去纤维素的原生质体阶段，复合物也无法穿透进入细胞质。

问题十四：HUVEC(人脐静脉内皮细胞)

Q：jetPRIME^®对HUVEC的DNA转染是否有效？

A：对于HUVEC细胞，推荐使用jetPEI^®-HUVEC，专为该细胞的DNA转染设计的特异性转染试剂。也可以用jetOPTIMUS替代。

问题十五：原代神经元

Q：对于原代培养的神经元，可以使用jetPRIME^®吗？

A：神经元很难转染，主要是因为其在培养的过程中不分裂。然而，jetPEI^®已被成功用于神经元的体外转染。也可以用jetOPTIMUS替代。

问题十六：巨噬细胞

Q：对于DNA转染巨噬细胞，jetPRIME的转染效率如何?

A：jetPRIME已成功用于Raw264.7的转染。按照standard condition,可以获得50%的转染效率；对于原代巨噬细胞或单核细胞、巨噬细胞衍生的巨噬细胞的DNA转染，应选择jetPEI-macrophage。也可以用jetOPTIMUS替代。

问题十七：质粒共转染

Q：当我想在一个实验中进行多个质粒的共转染时，我该如何操作？

A：对于多个质粒的转染，每孔DNA的总量不应超过说明书中标明的DNA量。每个质粒的比例根据质粒的大小、结构和期望的每个质粒的表达水平来应用。在每孔中，每个质粒至少应占总DNA量的10%。

问题十八：复合物

Q：jetPRIME^®/DNA复合物可以稳定多长时间？

A：复合物形成的15-30分钟内是获得最佳转染效率的时间。因此，对于需要较长孵育时间的高通量筛选，推荐使用jetPEI进行HTS, 因为jetPEI^®/DNA复合物可以稳定长达4小时。

问题十九：病毒包装

Q：jetPRIME^®是否适用于病毒包装？

A：jetPRIME^®可以用在传统培养基中进行病毒包装。实际上，在用于病毒包装的常规细胞中，使用jetPRIME^®的转染效率可达90%，例如HEK-293及其衍生株，CHO, VERO,WOP和BHK细胞，因此会产生高病毒滴度（Dewannieux,M., Vernochet, C., Bartoscho, B., Cosset, F.L., Heidmann, T (2011).The mouseIAPE endogenous retrovirus can infect cells through any of the fiveGPI-anchored Ephrin A proteins., PLoS Pthog 7, e1002）.

问题二十：细胞活性

Q：如何提高脆弱细胞的细胞活性（例如，原代成纤维细胞）？

A：转染对于细胞来说是创伤事件。改进细胞活性，可参考以下建议：

       -转染后4小时更换培养基

       -减少DNA的量

       -减少jetPRIME^®的体积

       -在含血清的培养基中进行转染

       -转染后24小时分析转染效率而不是48小时

       -确保使用jetPRIME^® buffer稀释jetPRIME和DNA

       -检测质粒不含内毒素

问题二十一：质粒大小

Q：使用jetPRIME^®做DNA转染会有质粒大小的限制吗？

A：使用jetPRIME^®做DNA转染没有质粒大小的限制。然而，记住同样的DNA量，大质粒的基因拷贝数比小质粒少。

问题二十二：siRNA

Q：可以使用jetPRIME^®转染siRNA吗？

A：jetPRIME^®完全可以用于siRNA转染，使用终浓度10-50nm的siRNA。然而，如果您主要感兴趣的是siRNA转染，那么试剂INTERFERin^®是您的选择。

问题二十三：保存

Q：jetPRIME^®如何保存？

A：jetPRIME^®是稳定的分子。室温运输jetPRIME^®和它的buffer，为长期保存，应储存在4°C。

问题二十四：加热

Q：当我收到jetPRIME^®试剂时，管子完全是温的。它是否仍然有效，能否继续使用？

A：jetPRIME^®是非常稳定的分子。我们已经做了测试jetPRIME试剂稳定性的实验。jetPRIME^®在50°C放置48小时后，仍表现出和保存在4°C时相似的转染效率。

问题二十五：冷冻

Q：我不小心冻存了我的jetPRIME^®试剂，我该怎么办？

A：jetPRIME^®可以耐受偶尔的冷冻，而不影响转染效率。然而，对于长期保存来说，我们建议分装并储存在4°C，以确保试剂长时间有效。

问题二十六：有效期

Q：jetPRIME^®试剂可以保存多久？

A：保存适当时，jetPRIME^®cat#114-01 (0.1mL)可以保存6个月。其他规格的jetPRIME^®至少可以保存1年。