Polyplus siRNA/miRNA转染试剂INTERFERin®(101000028)

产品简介：

INTERFERin®已经在1nM siRNA下提供了非常高的沉默效率，并且可以用于多种粘附细胞和悬浮细胞。使用低浓度的siRNA可以避免脱靶效应，其温和的作用模式确保了更可靠的数据和优异的细胞活力。由于其与血清和抗生素的兼容性，INTERFERin®易于使用，也非常适合转染miRNA和其他寡核苷酸，如pre-miRNA, mimic miRNA, antimiR….

一、更少的siRNA，更少的脱靶效应

一些出版物表明，转染低浓度的siRNA可以避免脱靶效应。事实上，当以高浓度转染siRNA时，可以观察到这些不想要的非特异性副作用（1，2）。因此，可以通过使用尽可能少的siRNA来提高实验数据的可靠性。这就是为什么INTERFERin®被专门设计为使用低siRNA浓度提供高沉默效率的原因。

INTERFERin®介导的1nM特异性siRNA的递送显示出对基因表达的选择性和高效敲低，而竞争对手（L2K）需要至少10nM的siRNA才能达到50%的沉默效率（图1）。

图1:INTERFERin®只需要1 nM的siRNA即可实现有效的基因沉默。根据制造商的建议，使用INTERFERin®或竞争对手L2K用抗-Luc siRNA转染稳定表达萤火虫萤光素酶的3LL细胞。48小时后使用常规测定法测量萤光素酶的表达。对照siRNA未观察到抑制作用。

令人惊讶的是，在10pM的siRNA下仍然实现了50%的沉默（图2）。

图2:INTERFERin®即使在极低的siRNA浓度下也是高效的。A549-GL3Luc细胞在血清存在下使用INTERFERin®转染，并降低抗-Luc siRNA的浓度。48小时后使用常规测定法测量萤光素酶的表达。对照siRNA未观察到抑制作用。

用INTERFERin®转染靶向内源性层粘连蛋白A/C的1nM siRNA可将层粘连蛋白基因表达显著降低至几乎无法检测的水平（图3）。

图3：用INTERFERin®转染1nM siRNA导致有效和特异的基因沉默。使用INTERFERin®用1nM层粘连蛋白A/C siRNA转染CaSki细胞。48小时后，通过免疫荧光显微镜测定层粘连蛋白A/C沉默效率。

二、适用于miRNA转染

microRNA（miRNA）寡核苷酸的转染正越来越多地用于分析特定miRNA对细胞功能的生物学影响。INTERFERin®是递送miRNA、miRNA模拟物或前miRNA的首选试剂。

INTERFERin®是最新一代siRNA和miRNA转染试剂，专为在多种细胞中实现高转染效率而设计，可实现高基因沉默或刺激基因表达。事实上，一些miRNA也已知通过与感兴趣基因的启动子结合来诱导基因表达。例如，INTERFERin®介导的miR-373递送导致E-钙粘蛋白表达增加3倍（图4）。

图4：用INTERFERin®转染miR-373可增强E-钙粘蛋白的表达。将PC-3细胞接种在6孔板中，并用miR-373（25 nM）转染，每孔使用8µl的INTERFERin®。转染后72小时，通过RT-qPCR测定E-钙粘蛋白mRNA的表达水平。

INTERFERin®的阳离子组分只需要很少的寡核苷酸量，从而实现温和的转染过程。此外，简单而稳健的协议确保了可重复的结果。像miRNA这样的寡核苷酸可以用少量的INTERFERin®转染，从而导致强烈的基因沉默或刺激基因表达。无论使用何种浓度的INTERFERin®，效果都大致相同，使INTERFERin成为一种经济的试剂。例如，使用不同体积的INTERFERin®的折叠变化总是在1.5和1.8之间（图5）。

图5:INTERFERin®在非常低的量下已经很有效。将PC-3细胞接种在6孔板中，并使用4、6或8µl/孔的INTERFERin®用miR-373（10nM）转染。转染后72小时，通过Western印迹分析E-钙粘蛋白的表达。使用β-肌动蛋白表达对测定进行标准化。以对照情况为参考表示量化。

与高细胞活力相关的高转染效率使INTERFERin®成为为科学出版物生成相关数据的首选试剂。事实上，自推出以来，使用INTERFERin®研究miRNA和miRNA相关分子的出版物数量呈指数级增长（图6）。

图6:INTERFERin®参与了越来越多关于miRNA转染的出版物。

三、超过90%的基因沉默

对于许多贴壁细胞系或原代细胞，1nM的siRNA足以获得90%以上的基因沉默。对于悬浮细胞系，使用5nM siRNA的INTERFERin®仍然可以达到80%的沉默（表1）。

表1：使用INTERFERin®成功转染细胞系和获得的沉默效率。

四、卓越的细胞活力

在细胞活力方面，INTERFERin®优于其他转染试剂。用1nM siRNA转染48小时后，用INTERFERin®转染的细胞看起来是健康的，而用试剂S可以清楚地观察到毒性（图7）。

图7:INTERFERin®对细胞极为温和，如使用INTERFERin®或竞争试剂转染siRNA 48小时后细胞形态的比较所示。根据制造商的方案，使用INTERFERin®或竞争对手S或H在血清存在下用1nM萤光素酶siRNA转染A549-GL3Luc细胞。

五、简单的Protocol

INTERFERin®可随时使用，且协议简单明了。1nM siRNA的起始浓度确保了大多数细胞类型中大多数基因的沉默（图8）。

INTERFERin®与血清和抗生素都兼容，因此避免了任何耗时的洗涤和介质更换；此外，INTERFERin®可以留在细胞上而没有任何不良影响。INTERFERin®可随时使用，且协议简单明了。1nM siRNA的起始浓度确保了大多数细胞类型中大多数基因的沉默(图8）。

INTERFERin®与血清和抗生素都兼容，因此避免了任何耗时的洗涤和介质更换；此外，INTERFERin®可以留在细胞上而没有任何不良影响。

图 8: INTERFERin® Protocol

产品应用：

Polyplus的INTERFERin®试剂非常适合进行RNA干扰实验，该实验对应于siRNA促进的基因表达的特异性抑制。siRNA是存在于植物、蠕虫和哺乳动物细胞细胞质中的基因特异性互补双链RNA寡核苷酸，可以用INTERFERin®有效地转染到细胞中.

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