亲和色谱(Affinity chromatography,又称为亲和层析)是一种利用固定相的结合特性来分离分子的色谱方法。亲和色谱在凝胶过滤色谱柱上连接与待分离的物质有一定结合能力的分子,并且这种结合是可逆的,在改变流动相条件时二者还能相互分离。亲和色谱可以用来从混合物中纯化或浓缩某一分子,也可以用来去除或减少混合物中某一分子的含量。
亲和色谱具有高选择性,而且能有效地保持生物大分子高级结构的稳定性,同时还具有对活性样品高回收率的特点,所以亲和色谱可以用来从细胞提取物中分离纯化核酸、蛋白质,还可以从血浆中分离抗体。分离重组蛋白就经常使用亲和色谱。
BioToolomics开发了多种亲和层析填料,比如谷胱甘肽亲和层析填料、蛋白A亲和层析填料、蛋白G亲和层析填料、钴亲和层析填料、镍亲和层析填料和肝素亲和层析填料等。
谷胱甘肽亲和层析填料(Glutathione SepFast)是一种用于快速纯化谷胱甘肽s -转移酶(GST)标记蛋白的亲和层析填料,可以快速纯化细菌、酵母、昆虫和哺乳动物细胞培养物中表达的GST标记蛋白。
蛋白A亲和层析填料和蛋白G亲和层析填料是一种用于纯化免疫球蛋白的亲和层析介质,可以用于从生物体液和细胞培养基中分离和纯化免疫球蛋白的类别、亚类和片段:
·Protein A SepFast Large Bead和Protein G SepFast Large Bead,粒径:150 - 350µm,特别适合处理粘性或含细胞的原料(即高沉降率和极低的柱压);
·Protein A SepFast HighRes和Protein G SepFast HighRes,粒径:20 – 50 µm,适合小柱运行,停留时间短(即较高的流速);
·Protein A SepFast和Protein G SepFast,粒径:50 – 150 µm,适用于大多数从小规模到大规模的纯化需求(即低柱压);
固定化金属亲和色谱 (IMAC) 基于某些过渡金属离子(主要是Ni2+、Zn2+和Co2+)与含有组氨酸(或半胱氨酸和色氨酸)的暴露氨基酸表面链之间的特定相互作用。IMAC用于纯化在细菌、酵母和哺乳动物细胞中表达的带组氨酸标签的重组蛋白,还可用于纯化某些天然的非标记蛋白质,例如干扰素、凝集素、抗体、血清和血浆蛋白、肽和肽激素。IMAC SepFast或其三种带金属电荷的形式(Ni SepFast、Co SepFast和Zn SepFast),具有高度稳定性并与蛋白质纯化过程中常用的多种化学品(例如去垢剂、变性试剂和还原剂等)兼容。
肝素亲和层析填料(Heparin SepFast)用于纯化对肝素有亲和力的生物分子,如抗凝血酶III、凝血因子和其他血浆蛋白、DNA 结合蛋白、脂蛋白、蛋白质合成因子、作用于核酸的酶和类固醇受体等。
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